莱卡公司超分辨显微镜采用的超分辨技术介绍

2000 年，德国科学家 StefanHell 开发了另一种超高分辨率显微技术，其基本原理是通过物理过程来减少激发光的光斑大小，从而直接减少点扩散函数的半高宽来提高分辨率。当特定的荧光分子被比激发波长长的激光照射时，可以被强行猝灭回到基准态。利用这个特性，Hell 等开发出了受激发射损耗显微技术 (stimulated emission depletion，STED)。其基本的实现过程如图 2 所示，就是用一束激发光使荧光物质(既可以是化学合成的染料也可以是荧光蛋白)发光的同时，用另外的高能量脉冲激光器发射一束紧挨着的、环型的、波长较长的激光将**束光斑中大部分的荧光物质通过受激发射损耗过程猝灭，从而减少荧光光点的衍射面积，显著地提高了显微镜的分辨率，原理见下图。、

STED 成像技术的*大优点是可以快速地观察活细胞内实时变化的过程，因此在生命科学中应用更加广泛。

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